中医中药是我国历史悠久的传统医学文化瑰宝，利用中药制备的汤剂来治疗相应的疾病源远流长，早在商朝的伊尹时期就可见相关记载[1-4]。因其中药组方灵活，可根据中医辨证论治的特点，对不同的患者和疾病证候进行随证加减，故而治疗效果确切，不良反应较少，而且使用时煎煮方便，吸收起效迅速，从而受到历代医家的广泛使用，是中医学从古延续至今重要的治疗方法之一[5]。然而，随着现代社会的不断发展，生活工作节奏的加快，传统中药煎剂也面临着一定的问题[6]。部分患者认为传统煎煮中药的方法用时过长，且对药物先下、后入等操作不明，故而临床用药选择时对传统煎剂的倾向性不高[7]，这也成为中药制剂现代发展的一个制约[8]。中药煎药机的出现则为中药煎剂的改良提出了另外一种可能，但由于现代煎药机煎煮模式与传统煎法存在较大差异[9]，且目前临床研究中尚缺乏对二者之间的差异进行全面、系统、客观的有效性评估，故部分医师及患者对煎药机制备药剂的使用效果仍存有疑虑[10-11]。在明代的《本草纲目》中也提到：“煎药者，水火不良，火候失度，则药亦无功”。也明确的提出了煎药方法及其质量的好坏能够极大的影响药物的疗效。本研究通过高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱选择以三黄汤为研究对象，比较使用传统煎药法与现代煎药机煎药2种不同制备手段所制的三黄汤煎剂之间的差异，从而对其差异及药物的有效性进行探讨和分析，以期为临床的药物使用提供参考。

1仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(型号：LC-20AT)购于日本岛津公司、二元泵(型号：LC-20AT泵)购于日本岛津公司等；高端型超纯水机(型号：ULUP)购于杜伯特(北京)科技有限公司；数控超声清洗器(型号：KQ50)购于昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试剂 于上海信跃化学品有限公司购买色谱乙腈、色谱甲醇、磷酸分析纯、冰醋酸分析纯等；甲酸分析纯购于东莞市聚鹏化学有限公司；中国食品药品检定研究院提供的对照品：黄芩苷(批号：-)。

1.3 分析样品 三黄汤的药方根据古方剂量，炙大黄(批号：)、黄芩(批号：)、黄柏(批号：)、甘草(批号：)，均购自广东省药材公司中药饮片厂，三黄汤随机抽取10个不同批次。

2方法与结果

2.1 色谱条件 采用4.6 mm×250 mm的DIAMONSIL C18保护柱(5 μm)，以30 ℃为柱温，无论是供试品溶液还是对照品溶液均在进样前以流动相梯度初始条件平衡30 min，进样量为15 μL，以甲醇为流动相A，1%磷酸水为流动相B，具体梯度洗脱程序见表1，检测波长为277 nm。

表1梯度洗脱程序(流速1.0mL/min)时间(min)流动相A(%)流动相B(%)

2.2 对照品溶液的制备 首先精密称取12.46 mg黄芩苷对照品，然后将其放置于60 ℃真空干燥，接着将干燥物转入广口瓶中并加70%甲醇定容至25 mL，经超声重复溶解均匀，制成0.028 mg/mL的黄芩苷对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 传统煎法供试品溶液制备 根据三黄汤配伍比例，取除大黄外的全部3味药加10倍量蒸馏水浸泡30 min，煎煮方法采用传统煎法加热煮沸10 min后，转小火煮40 min，加入炙大黄继续煎煮10 min，以0.45 μm微孔滤膜过滤，过滤液密封保存；剩余药渣再加8倍量蒸馏水，煎煮方法同第1次，并以0.45 μm微孔滤膜过滤，合并2次过滤液后进行浓缩，定容至2.80 g/ mL的三黄汤水煎液。精密量取0.2 mL三黄汤水煎液于10 mL量瓶中并以50%的甲醇定容，充分混合均匀后以0.45 μm微孔滤膜滤过，即得传统煎法供试品溶液。

2.3.2 现代药煎机法供试品溶液制备 根据三黄汤配伍比例，取全部3味药加10倍量蒸馏水浸泡30 min，加入炙大黄后直接采用现代煎药机(高压)法加热60 min后，煎煮所得药液以0.45 μm微孔滤膜过滤并密封保存；剩余药渣再加8倍量蒸馏水，以相同的现代煎药机煎煮相同时长，第2次煎煮所得药液以0.45 μm微孔滤膜过滤，合并2次过滤液，浓缩，定容至2.80 g/ mL的三黄汤水煎液。精密量取0.2 mL三黄汤水煎液于10 mL量瓶中并以50%的甲醇定容，充分混合均匀后0.45 μm微孔滤膜滤过，即得现代煎药机法供试品溶液。

2.4 专属性试验 取同一供试品溶液根据2.3制备的供试品溶液进行专属性试验，结果显示三黄汤专属性良好。

2.5 线性关系考察 精密量取黄芩苷对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0 μL，根据2.1色谱条件进行HPLC色谱法检测，记录峰面积；以峰面积积分值为纵坐标(Y)，对照品进样量(μg)为横坐标(X)，绘制标准曲线，黄芩苷回归方程Y=75.64X+21.31，r=0.999 8(n=5)，结果表明，黄芩苷对照品范围在0.5～12.0 μg/mL，线性考察结果显示线性关系良好。